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你知不知道裂解液的成分也會(huì)影響自動(dòng)核酸提取儀的提取效率

更新時(shí)間:2022-03-08瀏覽:1814次
  自動(dòng)核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來自動(dòng)完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應(yīng)用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。
 
  離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)和自動(dòng)移液裝置相結(jié)合的方法,通量一般在1-12個(gè)樣本,操作時(shí)間和手工提取差不多,并不能提高實(shí)際工作效率,且價(jià)格昂貴,不同型號(hào)儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。
 
  洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA,得到純度和濃度均很高的DNA,直接影響核酸得率,影響自動(dòng)核酸提取儀洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時(shí)間。
 
  一般核酸提取的主要步驟分為四步:裂解、吸附、洗滌和洗脫,每一步出現(xiàn)問題都會(huì)影響磁珠的提取效率,樣本裂解是裂解細(xì)胞或病原體,釋放里面的核酸。影響裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的溫度和時(shí)間。
 
  1、裂解溫度和時(shí)間:提高溫度和增加裂解時(shí)間可以讓細(xì)胞裂解更*,得到更多核酸,需要摸索合適的溫度和時(shí)間;溫度過高或時(shí)間過長,也有可能導(dǎo)致核酸斷裂或醇類揮發(fā)導(dǎo)致的提取效率下降。
 
  2、裂解液成分:對(duì)于一些難裂解的樣本,可以通過提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度來增強(qiáng)裂解液的裂解能力。
 
  3、吸附是磁珠吸附核酸的能力,影響吸附能力的有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面積以及修飾基團(tuán)的密度影響??筛鶕?jù)實(shí)際樣本選擇磁珠粒徑和修飾基團(tuán)。

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